步骤:
1.制冰,保证磁力分选器可以放入冰盒内操作,在4-8℃内进行分选;
2.配液磁珠分选缓冲液(50ml?pbs液中含2mmol/l?edta,0.5%bsa,ph=7.2);
3.将上步初步分选的中性粒细胞悬液用蜀科低速离心机300g离心10分钟,去上清;
4.细胞重悬于磁珠分选缓冲液中,107细胞重悬于80微升缓冲液中;(如细胞数多按倍数增加)
5.107细胞中加入20微升cd15磁珠;充分混匀放入2-8℃避光孵育15分钟;
6.用1-2ml缓冲液洗涤细胞/107细胞,再次用蜀科低速离心机300g离心10分钟,去上清;
7.重悬细胞于缓冲液中,108细胞重悬于500微升缓冲液中;
8.将磁力分选器置于冰盒中,用3ml缓冲液冲洗磁柱;
9.将含有中性粒细胞的缓冲液加入磁柱中;
10.用缓冲液冲洗磁柱,每次3ml,冲洗3次;
11.除去磁场,把磁柱放置于15ml离心管上,用5ml缓冲液加压快速冲洗磁柱;
12.离心管中收集的便是中性粒细胞;
13.最后用蜀科低速离心机300g离心去上清,重悬细胞于10ml细胞培养液中,细胞计数。